HIBRIDIZAÇÃO IN SITU

A hibridização in situ é uma técnica que permite a detecção de sequências específicas de DNA, ou de RNA, em um corte de tecido, ou em células, utilizando-se sequências complementares de DNA ou RNA, em fita única, marcadas, constituindo-se as “sondas,” que podem ser de DNA ou RNA clonados, ou de oligonucleotídeos sintéticos. As sondas estabelecem ligações de hidrogênio (pontes entre o átomo de hidrogênio e átomos fortemente eletronegativos, como o oxigênio, o flúor e o nitrogênio) com o DNA ou o RNA alvos, complementares, nos tecidos ou células, podendo ser visualizadas com marcadores radioativos (³²P, ¹²⁵I, ³⁵S e ³H), ou não radioativos (peroxidase, biotina, digoxigenina), ou por um fluorocromo (fluoresceína, rodamina, cianina, etc) caracterizando, o último, a hibridização in situ fluorescente (FISH).

A hibridização in situ é útil na detecção de genoma viral nos tecidos, na separação dos subtipos virais e na avaliação se a infecção é latente ou produtiva. Tem sido empregada para o vírus do papiloma humano (HPV, α‑Papillomavirus, Papillomaviridae), o vírus Epstein Barr (EBV, Lymphocryptovirus, Herpesviridae), o vírus da imunodeficiência humana (HIV, Lentivirus, Retroviridae), o adenovírus (Mastadenovirus, Adenoviridae), entre outros.

É também usada na identificação e diferenciação de hifas de várias espécies de fungos nos tecidos, como os do gênero Aspergillus, dentre as hialo-hifomicoses, entre outros.

No estudo das neoplasias permite detectar RNAs mensageiros (RNAm) de peptídeos hormonais, cadeias leves de imunoglobulinas, albumina, etc, de modo a se ter certeza de serem produtos das células neoplásicas em si, e não provenientes da difusão nos fluidos teciduais.

Também é empregada no estudo de alterações genéticas em várias neoplasias, assim como em combinação com outros métodos, a saber: imuno-histoquímica, a reação em cadeia da polimerase (PCR in situ), com ouro coloidal para visualização em microscopia eletrônica, etc.

Referências:

AFIP-Advanced Laboratory Methods in Histology and Pathology

Rosai, J. (ed.) - Chapter 3 - Special Techniques in Surgical Pathology. In: Rosai and Ackerman’s Surgical Pathology. Vol. 1 e 2. 10^th ed. Edinburg, Mosby/Elsevier, 2011, pp. 69.

Abaixo, um exemplo de hibridização in situ em corte de pulmão humano, proveniente de autopsia de criança com adenovirose pulmonar.

Adenovirose pulmonar humana aguda. A) Pneumócitos tipo II com alterações citopáticas (inclusões tipos roseta e borrada) típicas de adenovirose. PAMS, 400x. B) Inclusões borradas positivas para DNA de adenovírus. Hibridização in situ, 400x (In: Patologia e imunopatologia das adenoviroses pulmonares humanas aguda e crônica. Estudo imuno-histológico de componentes celulares, séricos e de matriz extracelular. Rio de Janeiro, Instituto Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, 1998, pp.96).